Alfa da subunidade do receptor do rato Interleukin-2; IL2R; CD25; Jogo de IL2-RA ELISA

Materiais fornecidos com o jogo

Exigências do espécime

• a coagulação do soro na temperatura ambiente 10-20 minutos, minuto da centrifugação 20 na velocidade de RPM 2000-3000 remove o supernatant, se a precipitação apareceu, centrifugador outra vez.
• o plasma serido plasma-uso como um anticoagulante, mistura do EDTA ou do citrato 10-20 minutos, minuto da centrifugação 20 na velocidade de RPM 2000-3000 remove o supernatant, se a precipitação apareceu, centrifugador outra vez.
• Urina-recolha para processar um recipiente estéril, centrifugação 20 que o minuto na velocidade de RPM 2000-3000 remove o supernatant, se a precipitação apareceu, centrifugador outra vez. A operação de Hydrothorax e referência fluida cerebrospinal a ela.
• a cultura celular supernatant-detecta componentes secretory, recolhe para processar um recipiente estéril, minuto da centrifugação 20 na velocidade de RPM 2000-3000 para remover o supernatant, para detectar a composição das pilhas, suspensão com PBS (PH7.2-7.4), concentração da pilha de Dilut da pilha alcançou 1 milhão/ml, ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável, pilhas de dano e a liberação de componentes intracelulares, minuto da centrifugação 20 na velocidade de RPM 2000-3000 remove o supernatant, se a precipitação apareceu, centrifugador outra vez.
• As amostras de tecido após ter cortado amostras, verificam o peso, adicionam PBS (PH7.2-7.4), congelado rapidamente com nitrogênio líquido, mantêm amostras em 2-8℃ após o derretimento, adicionam PBS (PH7.4), homogeneizado à mão ou os moedores, minuto da centrifugação 20 na velocidade de RPM 2000-3000 removem o supernatant.
• extraia o mais cedo possível após a coleção de espécime, e de acordo com a literatura relevante, e deva ser experiência o mais cedo possível após a extração. Se não pode, o espécime pode ser mantido no ℃ -20 para preservar, Avoid repetiu ciclos da gelo-aproximação amigável.
• Não pode detectar a amostra que contêm NaN3, porque NaN3 inibe HRP ativo.

Princípio

Este jogo de ELISA usa o sanduíche-ELISA como o método. O stripplate de Microelisa fornecido neste jogo foi pré-revestido com um anticorpo específico a IL2R. Os padrões ou as amostras são adicionados aos poços apropriados do stripplate de Microelisa e combinaram ao anticorpo específico. Então uma peroxidase do armorácio (HRP) - anticorpo conjugado específico para IL2R é adicionada a cada stripplate de Microelisa bem e incubada. Os componentes livres são lavados afastado. A solução da carcaça de TMB é adicionada a cada poço. Somente aqueles poços que contêm IL2R e HRP conjugaram o anticorpo do thrombomodulin parecerão azuis na cor e girarão então amarelo após a adição da solução da parada. A densidade ótica (OD) é medida spectrophotometrically em um comprimento de onda de 450 nanômetro. O valor do OD é proporcional à concentração de IL2R. Você pode calcular a concentração de IL2R nas amostras comparando o OD das amostras à curva padrão.

Notas:

• Armazene o jogo em 4°C em cima do recibo. O jogo deve ser equilibrado à temperatura ambiente antes do ensaio. Remova todas as tiras unneeded de placa Anticorpo-revestida de IL2R, reseal as na folha zip-lock e mantenha-as em 4°C.
• Precipitates pode aparecer no amortecedor de lavagem concentrado. Aqueça por favor o amortecedor para dissolver todo o precipita, que não afetará os resultados.
• A pipeta exata deve ser usada para evitar o erro experimental. As amostras devem ser adicionadas ao Microplate em menos de 5 minutos. Se um grande número amostras são incluídas, a pipeta do canal múltiplo está recomendada.
• A curva padrão deve ser incluída em cada ensaio. Os poços Replicate são recomendados. Se o valor do OD da amostra é maior do que o primeiro poço dos padrões, dilua por favor a amostra (tempos de n) antes do teste. Ao calcular a concentração original do thrombomodulin, multiplique por favor o fator total da diluição (XnX5).
• A fim evitar a contaminação colateral, os aferidores de Microplate são para o único uso somente.
• Mantenha por favor a carcaça longe da luz.
• Toda a operação deve ser acordo com as instruções do fabricante restritamente. Os resultados determinados pelo leitor da placa de Microtiter.
• Todas as amostras, amortecedor de lavagem e desperdícios devem ser tratados como agentes infecciosos.
• Os reagentes dos lotes diferentes não devem ser misturados.