Seleção Magbeads do ADN de GDSPure
Gato. Não: NC1011, NC1012, NC1013
 
Componentes

 
Armazenamento
Este reagente deve ser mantido em 2-8°C. Não se congele. A vida útil é 2 anos se fechada.
 
Descrição
Grânulos superparamagnéticos de capacidade elevada do uso de Magbeads da seleção do ADN de GDSPure e relação excelente do amortecedor para refinar e selecionar exatamente fragmentos do ADN de 150 bp a bp 1000 ou mesmo maior. Os nucleotides adicionais, os sais, as enzimas e outras impurezas introduzidos na operação da construção da biblioteca do ADN serão removidos após o processo de lavagem simples, para obter os fragmentos refinados, que podem diretamente ser usados em aplicações a jusante tais como arranjar em sequência, hibridação, PCR e digestão da enzima. A seleção Magbeads do ADN de GDSPure pode ser usada por formatos manuais e automáticos.
 
Aplicação

Seleção de tamanho e limpeza para arranjar em sequência da próxima geração (NGS), Sanger que arranjam em sequência, qPCR, ddPCR e microarrays, etc.
 

Trabalho preparatório antes da experiência

1. Solução de lavagem: 80% fresco (V/V) solução do álcool etílico

2. Solução do eluente: água ou TE Buffer nuclease-livre

3. Redemoinho

4. Cremalheira magnética

5. A fim assegurar a precisão da escala de seleção, o volume de amostra do ADN deve ser μL do ≥ 50

6. Antes da experiência, remova os grânulos magnéticos do refrigerador e aqueça-os à temperatura ambiente por mais de 20 minutos antes de usar

Protocolos

Seleção de tamanho dos fragmentos do ADN maiores do que um tamanho especificado (seleção Único-tomada partido)

1. Prepare a amostra do ADN de 50 μL em um tubo de centrifugador apropriado.

2. Adicione algum volume de seleção resuspended Magbeads do ADN de GDSPure de acordo com a primeira relação da adição do grânulo na tabela 1 à amostra. Delicadamente sopro com uma pipeta por 10 vezes (ou redemoinho para 30 s). Incube amostras para o minuto 5 na temperatura ambiente.

Por exemplo, para selecionar todos os fragmentos maiores de 250 bp na amostra, adicionam a suspensão magnética do grânulo de 40 μL (0.80X).

3. Coloque o tubo em uma cremalheira magnética apropriada para separar os grânulos do supernatant. Quando a solução for clara, para remover e rejeitar com cuidado o supernatant com uma pipeta (não rejeite grânulos).

4. Adicione o μl 200 do álcool etílico recentemente preparado de 80% ao tubo quando na cremalheira magnética. Incube na temperatura ambiente para 30 s, e para remover então e rejeitar com cuidado o supernatant (não perturbe grânulos).

5. Repita etapa 4 uma vez para um total de duas lavagens.

Nota: Seja certo remover todo o líquido visível após o segundo Washington.

6. O ar seca os grânulos até que a superfície dos grânulos magnéticos não tenha nenhum brilho óbvio quando o tubo estiver na cremalheira magnética com a tampa aberta.

Nota: Faça não overdry os grânulos, este pode conduzir a uma mais baixa recuperação do ADN. Quando os grânulos começam se rachar, estão demasiado secos.

7. Remova o tubo da cremalheira magnética. Elute o alvo do ADN dos grânulos na água ou em TE Buffer nuclease-livre do μl 30-40. Misture bem introduzindo com pipeta para cima e para baixo pelo menos 10 vezes ou em um misturador do redemoinho para 30 o S. incuba para o minuto 3-5 na temperatura ambiente.

8. Coloque o tubo na cremalheira magnética. Após o minuto 5 (ou quando a solução é clara), transfira o supernatant a um tubo novo. A seleção é terminada, e o ADN selecionado pode ser usado para experiências subsequentes ou ser armazenado em -20°C por muito tempo.

Seleção de tamanho de fragmentos do ADN em intervalos específicos do tamanho (seleção frente e verso)

1. Prepare a amostra do ADN de 50 μL em um tubo de centrifugador apropriado e etiquete-a como o A.

2. Adicione algum volume de seleção resuspended Magbeads do ADN de GDSPure de acordo com a primeira relação da adição do grânulo na tabela 1 ao sopro de A. Delicado do tubo com uma pipeta por 10 vezes (ou redemoinho para 30 s). Incube amostras para o minuto 5 na temperatura ambiente.

Por exemplo, para selecionar os fragmentos aproximadamente 250 bp na amostra, adicione a suspensão magnética do grânulo de 40 μL (0.80X).

• Coloque o tubo A em uma cremalheira magnética apropriada para separar os grânulos do supernatant. Quando a solução é clara, remova com cuidado o supernatant a um tubo novo e etiquete-o como grânulos de B. Rejeição.

4. Adicione algum volume de suspensão magnética do grânulo de acordo com a ?a relação da adição do grânulo na tabela 1 ao sopro de B. Delicado do tubo com uma pipeta por 10 vezes (ou redemoinho para 30 s). Incube amostras para o minuto 5 na temperatura ambiente.

Por exemplo, para selecionar os fragmentos aproximadamente 250 bp na amostra, adicione a suspensão magnética do grânulo de 10 μL (0.20X).

5. Coloque o tubo B na cremalheira magnética. Quando a solução for clara, para remover e rejeitar com cuidado o supernatant.

6. Adicione o μl 200 do álcool etílico recentemente preparado de 80% ao tubo B quando na cremalheira magnética. Incube na temperatura ambiente para 30 s, e para remover então e rejeitar com cuidado o supernatant (não perturbe grânulos).

7. Repita etapa 6 uma vez para um total de duas lavagens.

Nota: Seja certo remover todo o líquido visível após o segundo Washington.

8. O ar seca os grânulos até que a superfície dos grânulos magnéticos não tenha nenhum brilho óbvio quando o tubo estiver na cremalheira magnética com a tampa aberta.

Nota: Faça não overdry os grânulos, este pode conduzir a uma mais baixa recuperação do ADN. Quando os grânulos começam se rachar, estão demasiado secos.

9. Remova o tubo B da cremalheira magnética. Elute o alvo do ADN dos grânulos na água ou em TE Buffer nuclease-livre do μl 30-40. Misture bem introduzindo com pipeta para cima e para baixo pelo menos 10 vezes ou em um misturador do redemoinho para 30 o S. incuba para o minuto 3-5 na temperatura ambiente.

10. Coloque o tubo B na cremalheira magnética. Após o minuto 5 (ou quando a solução é clara), transfira o supernatant a um tubo novo. A seleção é terminada, e o ADN selecionado pode ser usado para experiências subsequentes ou ser armazenado em -20°C por muito tempo.

Tabela 1: Condições recomendadas para a seleção de tamanho

Notas

1. Leia por favor a instrução com cuidado antes de usar e opere-a de acordo com as instruções.

2. O álcool etílico no tubo de centrifugador deve ser removido na medida do possível antes da eluição para assegurar a eficiência da eluição.

3. O volume do eluente pode ser ajustado de acordo com as exigências experimentais, mas não menos o μL de 20.

4. Os grânulos magnéticos devem evitar operações da centrifugação, da congelação e o outro. Antes de usar, a suspensão dos grânulos pode ser inteiramente misturada pelo redemoinho e pelos outros métodos, e colocado por mais de 20 minutos para aquecer-se à temperatura ambiente.

5. Evite o líquido que pendura na tampa do tubo durante o redemoinho e que introduz com pipeta a operação para reduzir a perda do ADN.
 
GDSBio é uma empresa da alto-tecnologia centrada sobre o desenvolvimento, a produção e o mercado de produtos da ciência da vida da qualidade. A empresa tem uma linha de produtos completa, com a tecnologia do PCR como o núcleo, centrando-se sobre o PCR ordinário, construção da biblioteca quantitativa fluorescente do PCR, do NGS, eletroforese ácida nucleica e outras tecnologias da biologia molecular, e desenvolveu reagentes moleculars da pesquisa científica, in vitro matérias primas diagnósticas moleculars, reagentes da extração ácida nucleica e da detecção e outros produtos.