Pó PK N9016 100mg da protease K da categoria da biologia molecular de GDSBio

Pó da protease K

Categoria da biologia molecular, para o uso da pesquisa somente

Cat No. N9016

Tamanho: 100mg

Atividade específica: Proteína de ≥30 U/mg

Formulário: Contém a protease K (≥95%), pó liofilizado

Componentes

Armazenamento

-20ºC recomendou. A vida útil da protease K liofilizou o pó é três anos quando armazenada selado e seco abaixo de 4ºC. A protease K liofilizou o pó é enviada na temperatura ambiente.

Descrição

A protease K é um protease endolytic que fenda ligações de peptide nos lados carboxylic de ácidos aminados alifáticos, aromáticos ou hidrofóbicas. A protease K é classificada como um protease do serine. O peptide o menor a ser hydrolyzed por esta enzima é um tetrapeptide.

Características

• Protease de recombinação K

• Ativo em uma vasta gama de produtos da reação

Aplicações

• Isolamento do ADN genomic das pilhas cultivadas e dos tecidos

• Remoção dos DNases e do RNases ao isolar o ADN e o RNA dos tecidos ou das linha celular

• Determinação da localização da enzima

• Melhorando a eficiência de clonagem de produtos do PCR

Controle da qualidade

Atividade do DNase: Nenhum atividade de enzima detectável após 6 horas de incubação com ADN do λ em 37ºC.

Atividade do RNase: Nenhum atividade detectável do ribonuclease após 16 horas de incubação com RNA em 25ºC.

Fonte

Das pilhas de fermento com o gene clonado que codifica genetically projetou o protease endolytic do álbum de Engyodontium (álbum de Tritirachium).

Peso molecular

monômero do kDa 29,3.

Definição da unidade de atividade

Uma unidade da enzima libera os ácidos aminados Folin-positivos e os peptides que correspondem a 1 tirosina do µmol em 1 minuto em 37°C, hemoglobina desnaturada de utilização do pH 7,5 como a carcaça.

A atividade de enzima é analisada na seguinte mistura: Fosfato do potássio de 0,08 M (pH 7,5), ureia de 5 M, 4 milímetros de NaCl, 3 milímetros de CaCl₂ e 16,7 mg/ml hemoglobina.

Instruções da preparação

A solução conservada em estoque pode ser preparada como 40-80mg/ml no amortecedor da diluição [Tris-HCl de 20 milímetros (pH 7,4), 1 milímetro de CaCl₂] ou [Tris-HCl de 20 milímetros (pH 7,4), 1 milímetro de CaCl glicerol_de2, de 2%], ser esterilizada usando 0.22μm filtro e ser fornecida na concentração final de 20-40mg/ml no glicerol de 50%. Loja nas partes alíquota na variação da temperatura larga de 24ºC a -80ºC.

As membranas do PES e do PVDF com o baixo emperramento da proteína são recomendadas na filtragem estéril.

Inibição e inativação

Inibidores: A protease K não é neutralizada por chelators do metal, por reagentes tiolato-reativos ou por inibidores específicos do trypsin e da quimotripsina. O fluoreto de Phenylmethylsulfonyl e o phosphorofluoridate diisopropyl inibem completamente a enzima.

Neutralizado aquecendo em 95°C por 10 minutos.

Nota

• Atividade a melhor em 50-55°C.

• A desnaturação rápida da enzima ocorre em temperaturas acima de 65°C.

• A concentração de trabalho recomendada para a protease K é 0.05-1 mg/ml. A atividade da enzima é estimulada por 0.2-1% SDS ou pela ureia de 1-4 M.

• O Ca²⁺ protege a protease K contra a autólise, aumenta a estabilidade térmica e tem uma função reguladora para o local de emperramento da carcaça da protease K.

• Estábulo sobre uma escala larga do pH: 4.0-12.5, pH o melhor 7.5-8.0.

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