Imunoanálise enzimática para a detecção de anticorpos contra o vírus da hepatite humana tipo C (VHC) RUO

vírus da hepatite C (VHC), anteriormente descrito como a forma transmitida por via parenteral da hepatite não-A, não-B (NANBH)¹, torna-se uma doença crónica em 50% dos casos.²O VHC também pode ser transmitido através do abuso de drogas intravenosas e do contato doméstico.³O vírus da hepatite C é um vírus de RNA de cadeia única com algumas relações estruturais com a família dos flavivírus.As sequências de ácido nucleico de clones de cADN do VHC forneceram a base para a construção de peptídeos recombinantes que representam proteínas do vírus da hepatite C.^4,5triagem de anticorpos do vírus da hepatite C no sangue utilizando proteínas sintéticas ou recombinantes,Ajudou a identificar doadores de sangue aparentemente saudáveis com anticorpos anti-HCV que poderiam ter transmitido o vírus.⁶

Trata- se de um ensaio imunossorbente ligado a enzimas que utiliza proteínas recombinantes derivadas de regiões centrais do vírus do VHC para detectar a presença de anticorpos contra o VHC no soro humano.

Materiais fornecidos com os kits:

Procedimento de avaliação

Recomenda-se fortemente analisar cada amostra e cada controlo em duplo exemplar.

1. Dispensar 100 ml ((ou 3 gotas) de diluente da amostra em poços de ensaio individuais.
2. Disponibilizar 100 ml de duplicado de controlo positivo e de controlo negativo em poços individuais.
3. Adicionar 10 ml de cada amostra de ensaio em poços de ensaio duplicados; misturar por vórtice.
4. Incubação durante 30 minutos a 37°C
5. Lavar cada poço 5 vezes, enchendo cada poço com tampão de lavagem diluído, depois inverter vigorosamente a placa para retirar toda a água e bloquear a borda dos poços em papel absorvente durante alguns segundos.
6. Adicionar 100 ml de Enzima Conjugado a cada poço.Não adicione o Enzyme Conjugate ao poço em branco.
7. Incubação durante 20 minutos a 37°C
8. Lavar o prato 5 vezes como passo 5.
9. Adicionar uma gota (50 ml) de Solução de Substrato A (substrato HRP) a cada poço e, em seguida, adicionar uma gota (50 ml) de Solução de Substrato B (TMB) a cada poço. .
10. Adicionar uma gota (50 ml) de Solução Stop a cada poço para parar a reação de cor.É opcional a leitura do valor OD a 450 nm com um único leitor de placas de filtro. (usando o valor OD do poço em branco para corrigir toda a leitura OD de todos os poços)