Polimerase de ADN de Pfu

Descrição

A polimerase de ADN de Pfu, derivada do furiosus hyperthermophilic de Pyrococcus dos archae, tem o thermostability superior e as propriedades da correção comparadas à outra polimerase thermostable. Seu peso molecular é o kDa 90. Pode amplificar o kb até 2 do alvo do ADN (molde simples). A velocidade do alongamento é 1kb/min (70~75°C). A polimerase de ADN de Pfu possui 3' a 5' exonuclease que corrige a atividade que permite a polimerase de corrigir erros do nucleotide-misincorporation. Isto significa que que o ADN de Pfu polimerase-gerou os fragmentos do PCR terão menos erros do que inserções Taq-geradas do PCR. Usando a polimerase de ADN de Pfu em seus resultados das reações do PCR nos produtos sem corte-terminados do PCR, que são ideais para clonar em vetores sem corte-terminados. A polimerase de ADN de Pfu é superior para as técnicas que exigem a síntese do ADN da alta fidelidade.

Definição da unidade

Uma unidade é definida como a quantidade da enzima exigida para catalisar a incorporação do nmole 10 dos dNTPs em um formulário insolúvel nos ácidos em 30 minutos em 70°C usando o ADN hering do esperma como a carcaça.

Amortecedor do armazenamento

Tris-HCl de 20mM (pH 8,0), KCl de 100mM, 3mM MgCl_2, 1mM DTT, 0,1% NP-40, 0,1% Tween20, 0.2mg/ml BSA, 50% (V/V) glicerol.

amortecedorde Pfu de 10× com Mg2+

Tris-HCl de 200mM (pH 8,8), KCl de 100mM, 100mM (NH₄) ₂ TÃO₄, 20mM MgSO₄, 1% Triton X-100, 1mg/ml BSA.

Aplicações

• Reações do PCR e da primeira demão-extensão da alta fidelidade

• PCR da alta fidelidade para clonar em vetores sem corte-terminados

• mutagênese Local-dirigida

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