Thyroxine T4
Referência: Testes DS177703 96

1. Uso pretendido
Immunoassay para in vitro a determinação quantitativa do thyroxine no soro humano.

2. Sumário
O thyroxine da hormona (T4) é o produto principal segregado pela glândula de tiroide e é um componente integral do sistema de regulamento do pituitário-tiroide hipotálamo-anterior. Tem a função anabòlica de influenciar o metabolismo. O Thyroxine é formado em uma reação de acoplamento de duas moléculas de DIT (3,5-diiodotyrosine) na glândula de tiroide. É limite armazenado ao thyroglobulin no lumina dos folículo do tiroide e é segregado como necessário sob a influência de TSH. (1, 2) o maior parte (> 99%) do thyroxine total (T4) no soro esta presente na proteína? formulário de limite. Porque as concentrações das proteínas de transporte no soro são sujeitas aos efeitos exógenos e endógenos, o estado das proteínas obrigatórias deve igualmente ser tomado em consideração na avaliação da concentração da hormona de tiroide no soro. Se isto é ignorado, mudanças nas proteínas obrigatórias (por exemplo devido à hormona estrogênica? conter preparações, durante a gravidez ou na presença de uma síndrome nephrotic etc.) pode conduzir às avaliações errôneas do estado metabólico do tiroide. (3, 4, 5, 6, 7) a determinação de T4 pode ser utilizada para as seguintes indicações: a detecção de hipertireoidismo, a detecção de hipotiroidismo preliminar e secundário, e a monitoração da terapia da TSH-supressão. (8)
O ensaio T4 emprega um princípio competitivo do teste com um anticorpo dirigido especificamente contra T4. T4 endógeno, liberado pela ação do ácido sulfonic de 8 anilino-1-naphthalene (American National Standard).

3. Os materiais dos reagentes forneceram
• Microplate revestido, 8 X12 tiras, 96 poços, pré-revestidos com o T4 derivant.
• Calibradores, 6 tubos de ensaio, 1 ml cada um, prontos para uso; Concentrações: 0 (A), 2,5 (B), 5 (C), 10 (D), 15 (E) e 30 (F) μg/dL.
• O conjugado da enzima, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de HRP (peroxidase do armorácio) etiquetou o rato T4 monoclonal no amortecedor Tris-NaCl que contém BSA (albumina de soro bovino). Contém 0,2% preservativos ProClin300. American National Standard 1,5 mg/mL.
• Carcaça, 1 tubo de ensaio, 11ml, pronto para uso, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Pare a solução, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de 1 mol/l de ácido sulfúrico.
• Concentrado da solução da lavagem, 1 tubo de ensaio, 25 ml (40X se concentrou), solução da lavagem do PBS-Tween.
• IFU, 1 cópia.
• Tampa da placa: 1 parte.

4. Materiais exigidos (mas não fornecido)
• Leitor de Microplate com capacidade absorvente do comprimento de onda 450nm e 620nm.
• Arruela de Microplate.
• Incubadora.
• Abanador da placa.
• Micropipettes e micropipettes multichannel que entregam 50μl com uma precisão de melhor de 1,5%.
• Papel absorvente.
• Água destilada

Procedimento de teste

Assegure-se de que as amostras, os calibradores, e os controles dos pacientes estejam na temperatura ambiental (℃ 18-25) antes da medida. Misture todos os reagentes com delicadamente da inversão antes do uso.

• Use somente o número de poços exigidos e formate os poços dos microplates para que cada calibrador e amostra seja analisada. • Adicione o µL 50 dos calibradores ou das amostras a cada poço.

• Adicione o µL 50 do conjugado da enzima a cada poço.

• Agite o microplate delicadamente por 30 segundos para misturar.

• Cubra a placa com uma tampa da placa e incube-a no ℃ 37 por 60 minutos.

• Rejeite os índices da micro placa pela decantação ou pela aspiração. Se decantando, bata e borre o seco de placa com papel absorvente.

• Adicione o µl 350 da solução da lavagem, decante-o (torneira e mancha) ou aspire-o. Repita 4 vezes adicionais para um total de 5 lavagens. Uma arruela automatizada da tira do microplate pode ser usada. No fim da lavagem, inverta a placa e bata para fora toda a solução residual da lavagem no papel absorvente.

• Adicione o µL 100 da carcaça a cada poço.

• Cubra e incube na temperatura ambiental (18-25℃) na obscuridade para a reação por 20 minutos. Não agite a placa após a adição do substate. • Adicione o µL 50 da solução da parada a cada poço.

• Agite por 15-20 segundos para misturar o líquido dentro dos poços. É importante assegurar-se de que as mudanças azuis da cor a amarelar completamente.

• Leia a absorvência de cada poço em 450 nanômetro (que usa 620 a 630 nanômetro como o comprimento de onda da referência para minimizar imperfeições boas) em um micro leitor da placa. Os resultados devem ser lidos dentro de 30 minutos da adição param a solução